熒光原位雜交技術-武漢貝科新肽公司
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業務:原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
- 公司官網:bkxtbio.com.cn
- 公司地址:湖北省武漢市洪山區關山大道289號紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號
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原位雜交技術是一種在生物組織或細胞中定位DNA片段或RNA序列的重要生物技術,具有廣泛的應用前景。該技術在醫學、農業和工業等領域都有廣泛的應用,可以幫助人們深入理解基因表達和遺傳特征,熒光原位雜交技術,為疾病的診斷和、品種的鑒定和遺傳育種以及產品安全性和穩定性的檢測提供有效手段。隨著科技的不斷發展,原位雜交技術的應用前景將更加廣闊,為生命科學和醫學等領域的研究提供更多可能性。

將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應蓋嚴,以防液體蒸發。
雜交結束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉一次。重復洗 一次,同時應避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

雜交?。?) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

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