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在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物，AD與BD會(huì)在空間上充分接近，重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域，啟動(dòng)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，通過(guò)接合（mating）或共轉(zhuǎn)化使酵母同時(shí)擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并啟動(dòng)β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。
分子病理學(xué)是與分子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)等學(xué)科相互滲透，在蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、發(fā)病機(jī)制、形態(tài)變化及功能損害等方面發(fā)生和發(fā)展規(guī)律的新的分支學(xué)科，對(duì)疾病的病因、發(fā)展、發(fā)病機(jī)制及形態(tài)變化，從傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)概念深入至分子或基因水平，分子病理已成為腫1瘤病理研究中重要的內(nèi)容和手段。①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，分子病理技術(shù)服務(wù)，基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；
適用場(chǎng)景
1、高靈敏度地檢測(cè)蛋白-蛋白的交互作用；
2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點(diǎn)；
3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白；
4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽；
5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物；
6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。
酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)
1、無(wú)需純化蛋白；
2、檢測(cè)在活1細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實(shí)情況；
3、檢測(cè)的結(jié)果是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng)，因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用；
4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器1官、細(xì)胞類(lèi)型和分化時(shí)期材料構(gòu)建cDNA文庫(kù)，并能分析細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等多種亞細(xì)胞部位的蛋白。
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第4年
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