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湖北原位雜交-武漢貝科新肽科技公司-染色體原位雜交

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雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,原位雜交檢測,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預(yù)洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細(xì)菌碎片,湖北原位雜交,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉(zhuǎn)到盛有150ml預(yù)雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,染色體原位雜交,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預(yù)雜交1-2小時。

在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結(jié)合,染色體熒光原位雜交,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位

原位雜交法是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行定量定位的方法。原位雜交法可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。另有熒光原位雜交使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。

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