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主營(yíng)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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植物染色體原位雜交技術(shù)的應(yīng)用非常廣泛。例如，它可以用來(lái)研究植物基因組的結(jié)構(gòu)和功能，包括基因定位、染色體重組、基因表達(dá)和基因組演化等方面。此外，該技術(shù)還可以用來(lái)檢測(cè)植物中的染色體異常，如染色體缺失、重復(fù)和易位等。
植物染色體原位雜交技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于它可以直接觀察到染色體上的目標(biāo)DNA序列，而不需要進(jìn)行PCR擴(kuò)增或測(cè)序等操作。此外，該技術(shù)還可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)DNA序列，從而提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，原位雜交技術(shù)，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，原位雜交，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來(lái)疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，原位雜交公司，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
熒光原位雜交（FISH）技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：
高特異性：熒光探針的合成是定向的，保證了雜交過(guò)程的特異性，可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度：熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏，GISH，可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列，甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便：FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便，雜交過(guò)程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成，而且不需要過(guò)于復(fù)雜的設(shè)備，便于在實(shí)驗(yàn)室開展。
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第3年
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