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原位雜交-武漢貝科新肽-原位雜交檢測

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同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?

一般情況下,如果操作沒有得到理想的結(jié)果,原位雜交檢測,是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標(biāo)型探針,染色體原位雜交,還可以使用不同探針對同一樣本進行反復(fù)雜交。針對不同的樣本,處理方法略有不同。

原位雜交實操中哪些因素比較重要?

重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關(guān)系到原位雜交的穩(wěn)定性。

多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù),它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標(biāo)記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,呈現(xiàn)多種色彩,因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限,染色體熒光原位雜交,能同時檢測多個基因,在檢測遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用

FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,原位雜交,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

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