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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，染色體原位雜交，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理，5體節到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩，染色體熒光原位雜交，可以不用或者少用蛋白酶處理，發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
原位雜交技術還在以下生物領域有應用：
生態學和環境科學：在生態學和環境科學領域，原位雜交技術可以用于研究生物與環境之間的相互作用。例如，通過標記特定基因的探針，可以檢測環境中微生物種群的分布和變化，原位雜交，進而研究其對環境的影響和作用。
進化生物學：在進化生物學領域，原位雜交技術可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關系。例如，熒光原位雜交，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關系和進化歷程。
植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個方面：
1. 制備組織樣品：從植物中取出需要研究的組織樣品，如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品：將組織樣品固定在載玻片上，通常使用或乙醇等化學物質進行固定。
3. 處理組織樣品：對固定的組織樣品進行脫水、透明化、脫脂等處理，以便于DNA探針的穿透和結合。
4. 制備DNA探針：根據需要研究的基因序列，設計并合成DNA探針。DNA探針可以標記熒光染料或性同位素，以便于檢測。
5. 雜交DNA探針：將DNA探針與組織樣品進行雜交，通常需要在高溫下進行，以便于DNA探針與RNA或DNA結合。
6. 檢測雜交信號：通過熒光顯微鏡或計數器等設備，檢測DNA探針與RNA或DNA的結合情況，確定目標基因的表達模式和位置。
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第3年
