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原位雜交-武漢貝科新肽-原位雜交技術(shù)

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RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是:在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,原位雜交技術(shù)咨詢,用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體(Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術(shù)經(jīng)不斷改進(jìn),其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,熒光原位雜交,已成為有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

原位雜交技術(shù)(In situ hybridization,ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù),始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交,將該基因進(jìn)行定位,與此同時Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位,從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后,由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初,分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功,原位雜交技術(shù),為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子:

物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究:在物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)研究中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測物種之間的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。例如,原位雜交,可以比較不同物種之間特定基因序列的差異,進(jìn)而研究它們的親緣關(guān)系和進(jìn)化歷程。

原位雜交技術(shù)在基因表達(dá)和調(diào)控、細(xì)胞分化與發(fā)育、研究和物種進(jìn)化與系統(tǒng)發(fā)生學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價值,為深入探究生命現(xiàn)象、促進(jìn)生物技術(shù)的發(fā)展提供了有力的技術(shù)支持。

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