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武漢科銳諾生物科技有限公司
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| 先生： |
水稻種子是人類重要的食物來源，其發育涉及一個復雜的調控網絡，其中轉錄因子發揮了關鍵作用。MADS轉錄因子家族成員是植物花器1官發育的重要調控因子，已有的研究表明，幾乎所有的水稻MADS基因都在種子中表達，但對MADS家族成員參與水稻種子發育調控的研究結果仍比較少。
在這項研究中，研究組基于前期的表達譜研究基礎，分析得到了一個在水稻生殖發育階段優先表達的轉錄因子MADS29。細致分析表明，MADS29在花藥、胚珠和種子中均表達，且在受精后的母體組織表達量高。MADS29的反義轉1基因植株呈現種子皺縮、淀粉粒形態異常、灌漿速率下降等表型。通過解剖學切片、末端轉移酶標記實驗和全基因組表達譜芯片分析等，研究人員證明了MADS29通過調控程序化死1亡(PCD)過程促進珠心細胞和珠心突起處的降解。進一步的體外凝膠阻滯實驗顯示，MADS29能夠通過直接結合程序化死1亡相關基因的啟動子區域而調控其表達，進而影響胚乳發育。
原位雜交（in situ hybridization）將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交，使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補的另一條鏈在細菌或其他真核細胞中的位置。
原位雜交技術的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放1射性或非放1射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結合成專一的核酸雜交分子，經一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結合的標記物
后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），植物RNA原位雜交檢測服務，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
原位雜交的預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專1用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。
雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
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第4年
