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結(jié)1核病是嚴(yán)重威脅人類健康的傳1染性疾病,每年約有200萬人死于該病,其死1亡率在傳1染性疾病中僅低于艾1滋病,隨著醫(yī)1療診斷技術(shù)的迅猛發(fā)展,結(jié)1核病病理診斷經(jīng)歷了單一形態(tài)學(xué)和聯(lián)合特殊染色,到如今利用分子病理基因檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行準(zhǔn)確診斷的三個(gè)階段。

我科早在全1國(guó)建立了系統(tǒng)性結(jié)1核病分子病理診斷技術(shù)的平臺(tái),率1先將分子病理診斷技術(shù)在結(jié)1核病中應(yīng)用并推廣,解決了傳統(tǒng)病理對(duì)菌陰肺結(jié)1核及肺外結(jié)1核病的診斷率低、結(jié)1核病與非結(jié)1核分枝桿1菌病無法鑒別以及耐藥結(jié)1核病無法診斷等難題。同時(shí),我科作為中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)1核病學(xué)分會(huì)金1牌病理培訓(xùn)基地,負(fù)責(zé)組織制定了結(jié)1核病病理診斷規(guī)范、培訓(xùn)了大量的專1業(yè)技術(shù)人員,為形成結(jié)1核病病理學(xué)綜合診治新模式做出了卓1越貢獻(xiàn)!

目前,我國(guó)已穩(wěn)定開展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測(cè)序技術(shù)。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization,CISH)技術(shù)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合產(chǎn)生的一門新興技術(shù),是利用核酸分子單鏈間堿基互補(bǔ)的原理,將地1高辛或生物素標(biāo)記的外源核酸探針與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成雙鏈雜交分子,通過過氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應(yīng)將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。根據(jù)探針種類不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。

菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

(1) 在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,將濾膜放到小洼上,展平保鮮膜,使濾膜均勻濕潤(rùn),讓濾膜留于原處2-3分鐘。

(2) 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜,植物葉片原位雜交技術(shù)服務(wù),用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟(1)。

(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復(fù)一次該步驟。

(4) 吸干濾膜,把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜,轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上,置于室溫20-30分鐘,使濾膜干燥。

(5) 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間,在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí),固定DNA。

(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

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