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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
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一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，原位雜交技術(shù)，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，原位雜交檢測，室溫。
植物組織原位雜交技術(shù)在植物基因表達(dá)和調(diào)控研究中具有廣泛的應(yīng)用。它可以用來研究植物發(fā)育、生長、逆境響應(yīng)等方面的基因表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制。例如，可以利用該技術(shù)研究植物中的轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、代謝途徑等基因的表達(dá)和調(diào)控。此外，植物組織原位雜交技術(shù)還可以用來鑒定植物中的病原體、檢測植物等方面。
總之植物組織原位雜交技術(shù)是一種重要的分子生物學(xué)技術(shù)，可以用來研究植物基因的表達(dá)和調(diào)控。它具有操作簡便、結(jié)果可靠、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)，是植物分子生物學(xué)研究中不可或缺的工具。
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第3年
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