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植物原位雜交-原位雜交-武漢貝科新肽

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預雜交

1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。

2)用等體積的HYB+取代HYB-。

3)60℃水浴,原位雜交,預雜交4小時以上。

雜交

1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..

2)60℃ 溫浴過夜。

 注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,原位雜交檢測,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,染色體原位雜交,再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

原位雜交技術在許多領域都有應用,以下是其中幾個具體應用:

細胞生物學和發育生物學:在細胞生物學和發育生物學領域,原位雜交技術常被用于研究基因的表達和定位。例如,通過標記特定基因的探針,可以在細胞或組織中檢測特定基因序列的存在和分布,進而了解基因在細胞分化、發育和功能中的作用。

基因組學和遺傳學研究:原位雜交技術也可用于基因組學和遺傳學研究。例如,通過標記多個基因探針,可以檢測基因組中的多個基因序列,從而進行基因定位、基因表達譜分析、基因突變檢測等研究。

病毒學和病原微生物研究:在病毒學和病原微生物學領域,原位雜交技術常被用于檢測和定位病毒、細菌等病原微生物。例如,植物原位雜交,通過標記特異性或核酸探針,可以檢測組織中病原微生物的存在、情況以及分布特征,從而為疾病的預防、診斷和提供依據。

總之,原位雜交技術在生物學、醫學、基因組學、遺傳學、病毒學和病原微生物學等領域都有廣泛的應用價值,為人類認識生命現象、探究疾病機制和提供了有力的技術支持。

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