熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)--植物蛋白互作

  我們采用PCB1300-NLuc和PCB1300-CLuc

載體，分別將檢測(cè)的2個(gè)目標(biāo)基因序列克隆到對(duì)應(yīng)載體上，進(jìn)行融合瞬時(shí)表達(dá)，如果這個(gè)目標(biāo)蛋白相互作用，因?yàn)橛H和力作用，則熒光素酶的NLuc和CLuc會(huì)靠近并正確組裝，從而發(fā)揮熒光素酶活性分解底物產(chǎn)生熒光。

Co-IP  

CO-LP實(shí)驗(yàn)抗體和目標(biāo)蛋白高親和性和特異性識(shí)別，目標(biāo)蛋白質(zhì)及其相互作用的蛋白質(zhì)和抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在利用蛋白A/G瓊脂糖等親和樹(shù)脂結(jié)合抗體，將復(fù)合物從混合物中捕獲下來(lái)，最后通過(guò)洗滌和離心等步驟將復(fù)合物純化出來(lái)。進(jìn)行質(zhì)譜分析、免疫印跡等檢測(cè)。

pull down

pull down檢測(cè)蛋白和蛋白的相互作用，挑選相互作用的未知蛋白。構(gòu)建目的蛋白A原核表達(dá)載體和GST標(biāo)簽做融合表達(dá)，構(gòu)建B蛋白原核表達(dá)載體HIS標(biāo)簽做融合表達(dá)，分別對(duì)兩種蛋白進(jìn)行純化，最后把含A蛋白的填料和B純化液混合，通過(guò)處理后，進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)。