褪黑素作為一種調(diào)節(jié)生物鐘的激素，被廣泛用于改善睡眠的保健品中。準(zhǔn)確測(cè)定其含量對(duì)于保障產(chǎn)品質(zhì)量、消費(fèi)者安全和合規(guī)性至關(guān)重要。在眾多檢測(cè)方法中，高效液相色譜法（HPLC）結(jié)合熒光檢測(cè)器（FLD）是目前測(cè)定保健品中褪黑素的主流且可靠的技術(shù)，也是廣州中森檢測(cè)等專業(yè)機(jī)構(gòu)常用的方法之一。

方法核心：HPLC-熒光檢測(cè)法

1.原理簡(jiǎn)述：

*高效液相色譜（HPLC）：這是核心分離技術(shù)。樣品經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)那疤幚砗笞⑷肷V系統(tǒng)。樣品中的各種成分（包括褪黑素）在高壓驅(qū)動(dòng)下流過(guò)裝有特殊填料的色譜柱。由于不同物質(zhì)與填料的作用力不同，它們?cè)谏V柱中的移動(dòng)速度也不同，從而在時(shí)間上被分離開(kāi)來(lái)。

*熒光檢測(cè)（FLD）：這是關(guān)鍵的定量手段。被分離的褪黑素分子流出色譜柱后，進(jìn)入熒光檢測(cè)器。檢測(cè)器用特定波長(zhǎng)的光（稱為激發(fā)光，通常在280nm左右）照射褪黑素分子。褪黑素分子吸收光能后被激發(fā)，隨后會(huì)發(fā)射出波長(zhǎng)更長(zhǎng)（通常在340nm左右）的熒光。檢測(cè)器精確測(cè)量這種熒光的強(qiáng)度。

*關(guān)聯(lián)性：在特定且優(yōu)化的色譜條件下，褪黑素會(huì)在一個(gè)相對(duì)固定的時(shí)間（稱為保留時(shí)間）流出并被檢測(cè)到。最關(guān)鍵的是，在褪黑素濃度與檢測(cè)器測(cè)得的熒光強(qiáng)度之間，存在良好的線性關(guān)系。這是定量的基礎(chǔ)。

2.關(guān)鍵步驟（廣州中森檢測(cè)等機(jī)構(gòu)流程要點(diǎn)）：

*樣品前處理：這是確保結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵一步。不同類型的保健品（片劑、膠囊、液體等）需要不同的處理方式。通常包括研磨、溶解、提取（常用溶劑如甲醇、乙醇或緩沖液）、過(guò)濾或離心等步驟，目的是盡可能完全地將褪黑素從復(fù)雜的基質(zhì)（輔料、添加劑等）中提取出來(lái)，并去除干擾物質(zhì)。

*色譜條件優(yōu)化：專業(yè)人員會(huì)精心選擇和優(yōu)化色譜條件，包括：

*色譜柱類型（常用C18反相色譜柱）

*流動(dòng)相組成（通常是甲醇/水或乙腈/水，并加入緩沖鹽調(diào)節(jié)pH值）

*流動(dòng)相流速

*柱溫

*熒光檢測(cè)器參數(shù)設(shè)置：精確設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）和發(fā)射波長(zhǎng)（Em），以獲得褪黑素的最佳熒光響應(yīng)。通常Ex在280nm附近，Em在340nm附近。

*標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：使用已知濃度的褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣分析，繪制濃度與熒光峰面積（或峰高）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

*樣品分析與計(jì)算：處理好的樣品溶液進(jìn)樣分析。記錄褪黑素峰的保留時(shí)間（用于定性確認(rèn)）和峰面積（或峰高）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出樣品中褪黑素的實(shí)際含量。

為什么HPLC-熒光法被廣泛采用（如廣州中森檢測(cè)）？

*高靈敏度：熒光檢測(cè)對(duì)具有熒光特性的物質(zhì)（如褪黑素）非常靈敏，能檢測(cè)到很低的含量（如微克/克或更低），滿足保健品檢測(cè)要求。

*良好選擇性：通過(guò)色譜分離和熒光檢測(cè)器的雙重篩選，能有效排除保健品中常見(jiàn)輔料、色素、其他成分的干擾，提高結(jié)果的專屬性。

*準(zhǔn)確性高：基于標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法，結(jié)果可靠。

*相對(duì)成熟與普及：HPLC是分析實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備，方法成熟穩(wěn)定，易于在專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)（如廣州中森檢測(cè)）中建立和運(yùn)行。

*成本效益：相比更昂貴的質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（如LC-MS/MS），HPLC-熒光法在滿足常規(guī)檢測(cè)需求的同時(shí)，具有更優(yōu)的成本效益。

總結(jié)

HPLC結(jié)合熒光檢測(cè)器是測(cè)定保健品中褪黑素含量的金標(biāo)準(zhǔn)方法之一。廣州中森檢測(cè)等專業(yè)機(jī)構(gòu)利用該技術(shù)，通過(guò)精細(xì)的樣品前處理、優(yōu)化的色譜分離條件和靈敏的熒光檢測(cè)，能夠準(zhǔn)確、可靠地測(cè)定保健品中褪黑素的含量，為產(chǎn)品質(zhì)量控制、市場(chǎng)監(jiān)管和消費(fèi)者權(quán)益保護(hù)提供了重要的技術(shù)支持。這種方法的核心在于利用褪黑素的熒光特性，在高效分離的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)高靈敏度的定量分析。